蛋白质印迹法又叫做免疫印迹法,这是一种能够对固定在固相载体上蛋白质进行检测的免疫化学技术方法。待测蛋白除了可以为粗提物,而且还能够经过一定的分离和纯化。应用该项技术,待测蛋白的单克隆或多克隆抗体需要被利用来进行识别。可溶性抗原也就是待测蛋白的分离首先需要按照如分子量,分子大小,电荷以及其等电点等性质的差异采用不同的电泳方法。凝胶中的蛋白质通过电流被转移到聚偏二氟乙烯膜上。目的蛋白的钓取可以以抗体作为探针利用抗体(一抗)与抗原发生特异性结合的原理来进行。尤其留心的是在将一抗加入之前,首先需要将非特异性蛋白加入,例如膜被牛血清白蛋白“封阻”,而使膜的非特异性结合得以避免。
蛋白印迹仪被广泛应用于临床诊断领域,如筛选和确诊引起感染性疾病的不同致病源(如病毒或细菌),以及过敏原鉴定。全自动蛋白印迹仪能将蛋白印迹处理中的所有关键步骤自动化,尤其是繁琐的清洗和孵育步骤。为了保证仪器的性能,我们需要定期进行一些维护。
(1)清洁吸引泵(吸引泵堵塞是吸引无法进行的普遍原因)。启动本仪器。选择任何分析,进入泵初始化常规。将冲洗泵初始化一次,然后开启吸引泵。从仪器背面将当前工作的管道连接至废物瓶。在废物瓶盖处中断该管道并将该管道放置于盛有近10ml水的烧杯中。应用初始化常规吸引所有10ml水。将该管道重新连接至废物瓶盖.
(2)校准泵。泵校准常规用于调节每台泵的开启时间。在管道系统与泵的连接方式、与时间相关联的泵磨损度,以及制造方面的容许限度等方面允许存在差异。即使仪器在出厂时校准过,最好每年重新核对校准一次,或者只要泵管道系统更换则随时校准。在“进入编辑模式?”提示时按NO键即进入泵校准常规。在校准泵之前最好将泵初始化。AutoBlot 在校准常规开始前将提示你初始化泵。注意:在校准泵之前,确定压力垫已被锁定至少1小时,以便接近真实的操作状态。
(3)检查孵育定时器。孵育持续时间显示在仪器的前屏上。用秒表每年校验一次。由于(前屏)显示并未精确到秒,务必在周期开始时或(前屏)显示时间一更新就启动秒表
(4)如有需要将该仪器返回制造商进行预防性维护检查。更换新的管道系统,重新校准泵,整台仪器重新润滑和清洁,软件升级到最新版本。