垂直电泳是分离蛋白与核酸片段的常规手段，凝胶竖直放置在缓冲液槽之间，样品在电场驱动下沿胶体向下迁移，按分子大小形成条带。一套垂直电泳系统包括电泳槽、制胶玻璃板、梳齿、铂丝导线与电源，看似简单，出问题的花样却不少。本文按操作顺序梳理规范，并给出常见问题的处理思路。
制胶环节决定成败的一半。玻璃板清洗干净并擦干，油脂残留会让凝胶与板面结合不牢，剥离时破损；配制分离胶时避免气泡，灌胶后覆盖水层或醇层压平界面；凝固时间与环境温度相关，天冷时耐心等待，界面清晰才能倾去覆盖液加浓缩胶。梳齿插入时避免倾斜，拔梳后孔道若变形，用针头轻轻修整。
缓冲液配置容易埋雷。浓缩胶与分离胶缓冲液、电泳缓冲液的成分与酸碱度各有配方，配错其中一种，条带形态立刻异常。缓冲液可重复使用次数有限，多次使用后离子消耗、缓冲能力下降，拖尾与弥散会逐渐加重，记录使用次数并及时更换。
上样手法讲究稳与准。上样孔先用电泳缓冲液润洗，吸头伸到孔底缓慢推出样品，样品含甘油或蔗糖等增重剂，自然沉在孔底。孔内气泡或样品漂出，用细针头小心处理。电压设定按凝胶厚度与缓冲体系调整，起始阶段用低电压让样品堆积进入浓缩胶，染料前沿进入分离胶后再升压。
常见问题可对照排查。条带微笑或皱眉，多与电泳温度不均或电压过高有关，降低电压、启用循环冷却；拖尾严重，样品含盐过高或上样量超载，脱盐处理并减少上样体积；边缘效应，外侧重力造成边缘迁移不齐，加一孔空白样品或避免使用外侧孔道。
电泳结束及时取胶固定或转膜，凝胶久置在缓冲液中会膨胀变形。玻璃板与电泳槽用毕清洗晾干，铂丝导线避免磕碰，电源定期做绝缘检查。规范到位，垂直电泳的结果才有稳定的重复性。
耗材与配件的储备让实验少卡壳。制胶用玻璃板、垫条与梳齿成套编号，破损及时补充；电泳槽的密封胶条老化后漏液，备件盒里常存一套替换。试剂按用量分装，反复冻融的母液分小管保存，取用登记。这些小习惯积攒起来，实验室的运转就顺了。
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