一、概述
SDS-PAGE是蛋白质分离与鉴定的经典技术。它利用SDS变性蛋白质并赋予均一负电荷，使蛋白质在凝胶中的迁移率主要取决于分子量大小，从而实现按分子量分离，配合染色可评估蛋白纯度、纯度和相对含量，是蛋白研究中不可替代的基础工具。
二、分离原理
SDS-PAGE的分离原理基于两点。其一，SDS是阴离子去垢剂，其疏水基团与蛋白质的疏水区域结合，破坏蛋白质的二、三级结构，使其变性为伸展的肽链。结合比例大致恒定，约每克蛋白质结合固定量的SDS，使蛋白质表面的负电荷密度趋于一致，原有的电荷差异被掩盖。其二，聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺共聚形成，具有分子筛效应。凝胶孔径由单体浓度和交联度决定，浓度越高孔径越小。电泳时，小分子蛋白质在凝胶网络中迁移阻力小、速度快，大分子则阻力大、迁移慢，从而按分子量大小依次分开。 三、凝胶体系与电泳流程
SDS-PAGE最常采用不连续凝胶体系，包括浓缩胶与分离胶两层。浓缩胶浓度低、孔径大，pH值较低，样品在其中被浓缩堆叠，形成窄的起始区带，提高分辨率。分离胶浓度根据目标蛋白分子量选择，小分子蛋白使用高浓度胶，大分子蛋白使用低浓度胶，必要时可使用梯度胶同时覆盖宽分子量范围。缓冲系统中引入SDS维持变性状态，样品缓冲液中还含有还原剂（如DTT或巯基乙醇）断裂二硫键，以及甘油增加样品比重便于加样，示踪染料指示电泳前沿。
电泳流程包括：配制凝胶并聚合；制备样品，与上样缓冲液混合后加热变性；将凝胶安装于电泳槽，加入缓冲液，上样；接通电源，样品先经浓缩胶浓缩，再进入分离胶按分子量分离，染料前沿到达凝胶底部时结束电泳；取出凝胶进行染色，或用于转印后续免疫检测。
四、分子量测定与定量分析
SDS-PAGE结合标准蛋白可实现分子量测定。将已知分子量的标准蛋白与样品同时电泳，以迁移率对分子量对数作图得标准曲线，样品条带据曲线推算分子量。需注意某些翻译后修饰、二硫键保留或强疏水蛋白可能偏离标准曲线。
定量方面，凝胶经考马斯亮蓝或银染显色后，通过扫描与软件分析各条带的灰度值，可估算蛋白的相对含量，评估纯度与均一性。银染灵敏度更高，适合微量样品；考马斯染色操作简便，适合常规分析。
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