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蛋白质印迹法的含量测定方法说明

发布日期: 2023-10-29
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蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
 
1、标准曲线的制作
 
(1)从-20℃将1mg/ml BSA取出,室温融化后备用。
(2)将1.5ml离心管取18个,3个一组,分别标记为0μg,2.5μg,5.0μg,10.0μg,20.0μg,40.0μg。
(3)根据下面的表格将各种试剂加入到各管中。
(4)混匀后,室温放置2分钟,在生物分光光度计(Bio-Photometer,Eppentoff)上比色分析。
 
2、样品蛋白含量的检测
 
(1)取1.5ml离心管足够多,将1ml4℃储存的考马斯亮蓝溶液分别加入到每个离心管中,在室温下放置30分钟以后,就能够被用来对蛋白进行检测。
(2)将100ul 0.15mol/L NaCl溶液加入到取出的一管考马斯亮蓝溶液中,混匀放置2min中,就能够作为空白样品,在比色杯中倒入空白样品,在做好标准曲线的程序下按blank对空白样品进行检测。
(3)将空白样品弃掉,比色杯使用无水乙醇清洗2次(每次0.5mL),再将其使用无菌水洗一次。
(4)将95ul 0.15mol/L NaCl加入到取出的一管考马斯亮蓝溶液中,混匀后静置2min,往扣干的比色杯中倒入按sample键对样品进行检测。
 
 
蛋白印迹仪被广泛应用于临床诊断领域,如筛选和确诊引起感染性疾病的不同致病源(如病毒或细菌),以及过敏原鉴定。全自动蛋白印迹仪能将蛋白印迹处理中的所有关键步骤自动化,尤其是繁琐的清洗和孵育步骤。
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